A pesar de los supuestos históricos de esta zona de excepción, a la que se atribuyen poblamientos ancestrales, la constitución de Santa Ana la Real como villa habría de llegar en época tardía, allá por el s. XVIII. Fue Fernando VI quien, el 18 de noviembre de 1751 concedió el título de villa a la que hasta entonces había sido la aldea del Valle de Santa Ana, perteneciente a la jurisdicción de Almonaster la Real. Así se recoge en el pertinente documento que se custodia en el archivo municipal, la Cédula Real. Por aquel entonces la aldea era propiedad de María Teresa Márquez de Avellaneda, cuyo marido Gregorio del Valle Clavijo era un destacado caballero de la Orden de Santiago y ministro del Rey. La cesión de este núcleo, con poco menos de 60 habitantes, se efectuó por casi medio millón de maravedíes.
El libro 'Expedientes carcelarios de Santa Ana la Real y Santa Bárbara de Casa (Huelva). Prisión Provincial, 1936-1939' (Facediciones, 2008), de Juan José Antequera Luengo y Juan José Luengo Jiménez, da cuenta de cuantos vecinos sufrieron prisión durante la guerra civil española.